一、質(zhì)量控制相關(guān)定義

質(zhì)量控制：滿足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動(dòng)。

質(zhì)量保證：為了滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求 ，制定相應(yīng)的計(jì)劃，實(shí)施證明（記錄）所進(jìn)行的一系列的系統(tǒng)活動(dòng)

外部質(zhì)量控制：通過(guò)互相校準(zhǔn)和/或檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的操作和結(jié)果所進(jìn)行的控制

內(nèi)部質(zhì)量控制：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部采取的以對(duì)比分析、跟蹤以及相關(guān)方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作的連續(xù)性控制計(jì)劃。

質(zhì)量手冊(cè)：是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。

二、實(shí)驗(yàn)室要求

 按國(guó)家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的概念，是指一個(gè)能夠承擔(dān)法律責(zé)任的實(shí)體。這里所指的是實(shí)驗(yàn)室（微檢室）內(nèi)建立的質(zhì)量管理的保證體系。人員、房屋設(shè)備滿足檢測(cè)工作需要。

1、人員要求

實(shí)驗(yàn)室人員的分類：管理人員、技術(shù)人員、技術(shù)支持人員等。

相應(yīng)崗位的人員，應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力，相應(yīng)的技術(shù)能力證明（證書(shū)及證件）。

微生物檢驗(yàn)室因有相應(yīng)技術(shù)能力的人負(fù)責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作。并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。

2、房屋條件要求

房屋要求：具有適宜、足夠?qū)挸ā⑼L(fēng)有良好的照明。

房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采用易于清潔的材料，保持房間清潔。

房間的設(shè)置，以其開(kāi)展的工作內(nèi)容加以分用，設(shè)立專用房間。

房間的大小還應(yīng)根據(jù)從事實(shí)驗(yàn)人員的進(jìn)入數(shù)量上加以考慮。

3、環(huán)境設(shè)施要求

專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）

特殊環(huán)境的微生物指標(biāo)控制與記錄（無(wú)菌室等）

專用工作室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和定期的檢測(cè)校準(zhǔn)程序。（潔凈室等）

特殊環(huán)境中的專用設(shè)施質(zhì)量控制應(yīng)符合有關(guān)要求（凈化工作臺(tái)）

三、設(shè)備控制和程序

1、微生物檢驗(yàn)常用需監(jiān)控的設(shè)備和儀器

培養(yǎng)箱（生化培養(yǎng)箱或CO2培養(yǎng)箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺(tái)、pH計(jì)、冰箱（低溫冰箱或冷柜）溫度計(jì)、紫外燈、顯微鏡、離心機(jī)?、電子天平。

小計(jì)量容器

微生物測(cè)定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標(biāo)儀專用等。

2、具體設(shè)備控制

（1）高壓滅菌鍋的溫度控制

高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計(jì)等方法進(jìn)行檢測(cè)。

生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。

高壓滅菌鍋由專人按作業(yè)指導(dǎo)書(shū)操作，并做好每一次的作業(yè)記錄。

高壓滅菌鍋使用時(shí)，內(nèi)置物品不能太多，單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基）不能太多。同時(shí)應(yīng)注意內(nèi)容物不同耐受溫度?？偟谋┞稌r(shí)間最好不要超過(guò)45min。

高壓滅菌鍋日常工作記錄應(yīng)包含以下信息：高壓滅菌的材料、開(kāi)始時(shí)間、壓力/溫度、取出時(shí)間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無(wú)菌培養(yǎng)代替）

高壓滅菌鍋溫度波動(dòng)范圍：110，115和121±2℃。

高壓滅菌鍋校準(zhǔn)周期一般在半年。

（2）干燥滅菌箱溫度控制

干燥滅菌箱日常工作記錄中應(yīng)包括以下信息：開(kāi)始的時(shí)間、到達(dá)滅菌溫度時(shí)的時(shí)間、取出的時(shí)間（或關(guān)閉時(shí)間）。

干燥滅菌箱的溫度校準(zhǔn)；用參考溫度計(jì)進(jìn)行溫度測(cè)試。

干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者為滅菌2h，后者為30min。

干燥滅菌箱校準(zhǔn)時(shí)間一般為一年。

（3）培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制

對(duì)于蒸餾水器來(lái)說(shuō)：按設(shè)備說(shuō)明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。

檢測(cè)要求：西歐標(biāo)準(zhǔn)為微生物檢驗(yàn)用蒸餾水的特定電導(dǎo)率＜0.5ms/m；細(xì)菌數(shù)＜50cfu/ml。我們?nèi)粘Ｓ玫臉?biāo)準(zhǔn)為＜10ms/m，未見(jiàn)有細(xì)菌指標(biāo)。

檢測(cè)頻率：1次/每月。

蒸餾水定點(diǎn)供應(yīng)，并做好相應(yīng)的質(zhì)量控制，記錄檢測(cè)結(jié)果。

（4）天平的管理

天平放置要求：無(wú)振動(dòng)、無(wú)氣流影響及水平臺(tái)面上。

天平要有使用及運(yùn)行檢查記錄。

天平作為計(jì)量?jī)x器是列入國(guó)家強(qiáng)制檢定的范圍，一般1次/年進(jìn)行檢定。

運(yùn)行檢查頻率按運(yùn)行計(jì)劃或按產(chǎn)品（天平生產(chǎn)廠家）給出的標(biāo)準(zhǔn)重量單位進(jìn)行對(duì)照

（5）pH計(jì)

pH計(jì)使用前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)。

緩沖液使用有效期：PH4.00 約1年

PH7.00 約6個(gè)月

pH9.00 約6個(gè)月

pH計(jì)的維護(hù)：電極外表的定期清洗；電極敏感性檢測(cè)及極性恢復(fù)。

（6）凈化工作臺(tái)的控制

水平流凈化工作臺(tái)工作區(qū)域，要求潔凈度為100級(jí)。空氣沉降30min，細(xì)菌數(shù)＜1個(gè)/皿。垂直流凈化工作臺(tái)，細(xì)菌數(shù)＜0.49個(gè)/皿.

凈化工作臺(tái)運(yùn)行檢查頻次：1次/月主要是細(xì)菌沉降檢測(cè)。

凈化工作臺(tái)高效過(guò)濾膜一般為一年更換一次，并同時(shí)進(jìn)行粒子與細(xì)菌沉降檢測(cè)。

（7）紫外線燈的控制

檢測(cè)方法：儀器測(cè)試法和生物測(cè)試法。前者是通過(guò)專用儀器檢測(cè)紫外燈管發(fā)射的紫外光強(qiáng)度。國(guó)家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照射無(wú)1米處，要求其強(qiáng)度為90。

生物測(cè)試法：采用一定的菌培養(yǎng)物，經(jīng)一定比例稀釋，菌量控制在200-250個(gè)/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射，2min，同時(shí)設(shè)置普通光源的對(duì)照組，后置37℃48h，計(jì)算其殺滅率。要求殺滅率達(dá)99%。

（8）顯微鏡的控制

顯微鏡應(yīng)制定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)，日常維護(hù)記錄及自校記錄。

顯微鏡應(yīng)置于無(wú)振動(dòng)，避免灰塵，防潮等要求的環(huán)境。

（9）其它微生物檢測(cè)專用儀器的控制

細(xì)菌鑒定儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備，工作中常用陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)其功能正常性。

儀器的檢定則按有關(guān)的部門檢定或按自校作業(yè)指導(dǎo)書(shū)進(jìn)行。

儀器的使用登記、校準(zhǔn)計(jì)劃、校準(zhǔn)記錄等文件存檔。

儀器專人使用、操作者應(yīng)取得相應(yīng)的崗位培訓(xùn)合格，持證上崗。

四、培養(yǎng)基質(zhì)量控制

正確進(jìn)行培養(yǎng)基質(zhì)量控制，并作為一項(xiàng)經(jīng)常性的工作，建立完整的檢驗(yàn)資料，是實(shí)驗(yàn)室今后通過(guò)相應(yīng)級(jí)別的認(rèn)證，在整個(gè)檢驗(yàn)質(zhì)量控制體系中所必須具備的文件資料。

現(xiàn)有的依據(jù)：衛(wèi)生部1993年發(fā)布的食品檢驗(yàn)用干燥培養(yǎng)基生產(chǎn)質(zhì)量控制。但這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)不完善。

1、常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

檢驗(yàn)項(xiàng)目與方法：對(duì)新批號(hào)的干燥培養(yǎng)基物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定

A：感官（外觀）研細(xì)程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質(zhì)等；

B：PH測(cè)定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應(yīng)在6.4-7.0之間。

C：生物學(xué)指標(biāo)檢定，被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細(xì)菌生長(zhǎng)率測(cè)試；菌落大小及特征的檢測(cè)。

生長(zhǎng)率測(cè)試：適用與液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進(jìn)行平板計(jì)數(shù)或接種被檢的培養(yǎng)基試管，同時(shí)以按相關(guān)的培養(yǎng)基國(guó)標(biāo)配方新鮮配制的培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照。不低與10%。

菌落大小測(cè)試：劃線分離測(cè)試菌，取10個(gè)菌落測(cè)量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養(yǎng)基無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2、常用培養(yǎng)基質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

外觀和理化標(biāo)準(zhǔn)：

干粉顏色：淡黃色粉末或呈現(xiàn)本培養(yǎng)基特有的顏色

溶解后培養(yǎng)基色澤：清晰透明（含瓊脂除外）淡黃色或特有的色澤；

滅菌后的培養(yǎng)基PH：7.2±2℃為多；個(gè)別弧菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基pH值偏高為：8.0 ±2℃

生物學(xué)指標(biāo)：菌落特征及菌落大小 。

3、培養(yǎng)基保存環(huán)境

制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質(zhì)、遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細(xì)查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8 ℃條件保存。

有的培養(yǎng)基則以存放于10-15 ℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基。

4、培養(yǎng)基制備控制程序

培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備必須經(jīng)過(guò)相應(yīng)的鑒定。

配制培養(yǎng)基所用的用具及容器配制培養(yǎng)基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的，一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿，必要時(shí)可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后，取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數(shù)分鐘，再用3%鹽酸溶液進(jìn)行中和，然后用清水沖洗，烘干后備用。

5、培養(yǎng)基配制原料，試劑質(zhì)量控制

配制好的培養(yǎng)基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。，因?yàn)榕囵B(yǎng)培養(yǎng)基吸收空氣中的二氧化碳，會(huì)使培養(yǎng)基變酸，從而影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。

培養(yǎng)基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱量，抑制劑要注意合理配伍。

6、培養(yǎng)基主要原料的質(zhì)量控制

配制培養(yǎng)基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無(wú)機(jī)鹽和瓊脂等，這些主要原料的有劣，直接影響到培養(yǎng)基的質(zhì)量，由此也將影響檢驗(yàn)質(zhì)量。

指標(biāo)有感官、理化、物理、生物學(xué)。

五、檢測(cè)質(zhì)量保證

定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和次級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)或能力驗(yàn)證，利用相同或不同方法進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，對(duì)留存的樣品進(jìn)行在檢測(cè)。

微生物檢驗(yàn)質(zhì)控方法如下：

1、菌落計(jì)數(shù)精密度控制直接計(jì)數(shù)

選擇同一標(biāo)本，要求檢驗(yàn)人員進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

將大腸菌（25922）或經(jīng)檢定標(biāo)化的菌片，通過(guò)合適的梯度稀釋，選擇合適的稀釋度進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)操作。36±1℃培養(yǎng)24h進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

菌落計(jì)數(shù)精密度控制重復(fù)計(jì)數(shù)法

2、重復(fù)計(jì)數(shù)要求

自身同一平皿重復(fù)計(jì)數(shù)誤差 小于7.7%

實(shí)驗(yàn)人員之間同一平皿重復(fù)計(jì)數(shù)誤差 ±18 .2%

自身同一梯度平行加樣兩皿間相對(duì)誤 小于7.7%

實(shí)驗(yàn)人員之間同一梯度計(jì)數(shù)誤差X±18 .2%范圍

不同梯度間菌落計(jì)數(shù)最終誤差 小于7.7%

3、菌種鑒定質(zhì)控

菌種鑒定質(zhì)控要求，對(duì)所給的微生物菌種，按有關(guān)的方法及指標(biāo)進(jìn)行生化、血清等方面的鑒定。

鑒定質(zhì)量評(píng)價(jià)：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術(shù)是否熟練，結(jié)果報(bào)告是否正確。每一項(xiàng)設(shè)立分值為25分?？偡譃?00分。

4、內(nèi)部質(zhì)量控制的推薦頻率

菌落計(jì)數(shù)精密度控制： 1次/3月；

菌種鑒定控制： 1次/半年或1年

盲樣測(cè)定丟失的對(duì)照 1次/半年

六、實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)

1、培訓(xùn)與告之

實(shí)驗(yàn)室管理人員及實(shí)驗(yàn)人員必須了解相關(guān)工作有關(guān)的危險(xiǎn)。對(duì)招收新職工、工作開(kāi)始發(fā)生變化或使用新方法，啟用新的設(shè)備時(shí)，這點(diǎn)尤為重要。所有工作人員，包括清潔和服務(wù)人員都要知道。需要進(jìn)行口頭和書(shū)面兩種方式的通知。有關(guān)儀器必須要有字跡清楚其安全使用的書(shū)面說(shuō)明。

2、標(biāo)志

在進(jìn)行致病性微生物工作的房間人口處必須要有警示標(biāo)志。

實(shí)驗(yàn)室的房間必須以使與微生物有關(guān)的危險(xiǎn)得以過(guò)免的方式裝置，以使微生物的傳播得到限制，房間還應(yīng)便于清潔和消除污染．工作臺(tái)必須由光滑的、耐消毒劑的材料制成。難以清潔的角落、彎頭及管道應(yīng)盡可能地避免污染。

3、防止空氣污染

加熱培養(yǎng)蒙或其它化學(xué)物質(zhì)時(shí)，粉塵可擴(kuò)做到空氣中．這可給工作人員帶來(lái)過(guò)敏反應(yīng)或出現(xiàn)其它問(wèn)題．因此，設(shè)計(jì)排風(fēng)裝置很重要，以至包括天平附近的抽風(fēng)點(diǎn)。通常稱量應(yīng)按正確的安全規(guī)程進(jìn)行。

4、有毒有害物防護(hù)

濃酸和堿及其它腐蝕性化學(xué)物質(zhì)和毒性物質(zhì)必須專門保存，盡可能鎖存，以使它們引起的損害減至最低．

對(duì)實(shí)驗(yàn)室所用的所有化學(xué)物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)室必須有記述其危險(xiǎn)及操作中可能的限制的產(chǎn)品表．

在所需的范圍內(nèi)工作人員必須使用人體防護(hù)裝置，防護(hù)服、手套籌．使用安全設(shè)施是實(shí)驗(yàn)人員的職責(zé)污染了的防護(hù)員應(yīng)盡快地更換，離開(kāi)工作室時(shí)，必須脫去。

5、消除污染和廢物的處理

實(shí)驗(yàn)室必須要有關(guān)于應(yīng)如何消除濺出的微生物污染的書(shū)面說(shuō)明。另外，對(duì)廢物的處理，如用過(guò)的培養(yǎng)皿和打碎的玻璃器皿，應(yīng)有固定的程序。所有被洗的物品在洗刷前均經(jīng)高壓滅菌，洗滌工受微生物感染的危險(xiǎn)就可以盡可能避免。

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