色譜作為一種分離技術(shù)與方法，自20世紀(jì)40年代以后，逐漸得到發(fā)展，而且其勢頭越來越猛，從技術(shù)到理論，再到各種分離模式，以及在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物臨床、化學(xué)化工、食品安全、環(huán)境監(jiān)測、商品檢驗(yàn)、法醫(yī)檢驗(yàn)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，現(xiàn)已成為分析化學(xué)學(xué)科中的一個(gè)重要分支，對科學(xué)的進(jìn)步和生產(chǎn)的發(fā)展起著重要的作用。各種色譜儀器已成為各類研究室、實(shí)驗(yàn)室極為重要的儀器設(shè)備。

   經(jīng)常會用到的色譜法主要有五種：柱色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法和超臨界流體色譜法。本文主要介紹前三種。

一、柱色譜法

    是最原始的色譜方法。

    該方法將固定相注入下端塞有棉花或?yàn)V紙的玻璃管中，將被樣品飽和的固定相粉末攤鋪在玻璃管頂端，以流動相洗脫。

    常見的洗脫方式有兩種：一種是自上而下依靠溶劑本身的重力洗脫，另一種：自下而上依靠毛細(xì)作用洗脫。

    收集分離后的純凈組分也有兩種不同的方法：一種方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一種方法是烘干固定相后用機(jī)械方法分開各個(gè)色帶，以合適的溶劑浸泡固定相提取組分分子。

    柱色譜法被廣泛應(yīng)用于混合物的分離，包括：對有機(jī)合成產(chǎn)物、天然提取物以及生物大分子的分離。

二、薄層色譜法（TIC）

    是應(yīng)用非常廣泛的色譜方法。

    這種色譜方法將固定相涂布在金屬或玻璃薄板上形成薄層，用毛細(xì)管、鋼筆或者其他工具將樣品點(diǎn)于薄板一端，之后將點(diǎn)樣端浸入流動相中，依靠毛細(xì)作用令流動相溶劑沿薄板上行展開樣品。

    薄層色譜法成本低廉、操作簡單，被用于對樣品的粗測、對有機(jī)合成反應(yīng)進(jìn)程的檢測等用途。

三、高效液相色譜法（HPLC）

    是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法。

    高效液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是，針對其流動相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC輸液泵要求輸液量穩(wěn)定平衡；進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利、切換嚴(yán)密；由于液體流動相黏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于氣體，為了減低柱壓，高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。

    HPLC應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。高效液相色譜法依據(jù)溶質(zhì)（樣品）在固定相和流動相中分離過程的物理化學(xué)原理可以分為以下幾種：

①吸附色譜：用固定吸附劑做固定相，以不同極性溶劑做流動相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。

②分配色譜

③親水作用色譜

④疏水作用色譜

⑤離子色譜

⑥體積排阻色譜

⑦親和色譜